انتقال ژن های OF۲ و VAP به چغندرقند با کمک آگروباکتریم ریزوژنز برای بررسی مقاومت به نماتد

ژن های OF۲ (نوعی اکسالات اکسیداز) و VAP که در مسیر پیام رسانی مقاومت به نماتد سیستی در چغندرقند هستند، قبلا به ترتیب به کمک نشانگر مولکولی AFLP و سیستم دو هیبریدی در ناقل باکتریایی همسانه شده اند. برای آزمون قابلیت این ژن ها در ایجاد مقاومت در چغندرقند، ژن ها به ناقلین گیاهی قابل بیان منتقل گردیدند. برای این منظور، ژن OF۲ پس از جداسازی، درون T-DNA ناقل دوگانه pAM۱۹۴ در پایین دست پروموتر ذاتی CaMV۳۵S و نیز درون T-DNA ناقل دو گانه pBin۱۲۱ تغییر یافته در پایین دست پروموتر القایی ژن Hs۱pro-۱ (ژن مسوول ایجاد مقاومت به نماتد سیستی) قرار گرفت. ژن VAP نیز پس از جداسازی ازهمسانه اولیه، در T-DNA پلاسمید pAM۱۹۴ در پایین دست پروموتر ذاتی CaMV۳۵S قرار گرفت. بدین ترتیب، سه سازه جدید که بیان کننده ژن هایی از مسیر پیام رسانی مقاومت به نماتد چغندرقند بودند ساخته شد. سپس این سه پلاسمید به آگروباکتریوم ریزوژنز سویه AR۱۵۸۳۴ جداگانه منتقل شدند و پس از آن، جداکشت دم برگ گیاه چغندرقند با آگروباکتریای تلقیح شد. ریشه های مویین حاصل از تراریختی، پس از تایید اولیه با روش رنگ آمیزی GUS و PCR، به منظور بررسی مقاومت با لارو نماتد تلقیح شدند. نتایج اولیه وجود مقاومت نسبی در برابر لارو نماتد را در شماری از ریشه های مویین نشان داد. این مقاومت را می توان به اثر ژن های OF۲ و VAP نسبت داد.

پیمان نوروزی
دگوان کای
محمدعلی ملبوبی
بهمن یزدی صمدی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی