دوشنبه, ۱۴ خرداد, ۱۴۰۳ / 3 June, 2024
مجله ویستا
تشخیص سریع باکتری عامل حصبه به روش Multiplex PCR بر اساس ژنهای tyv, invA, prt، تعیین ردیف و مقایسه سکانس سویه جدا شده از ایران با بانک ژن
● هدف:
تشخیص سریع مولکولی باکتری سالمونلاتیفی عامل بیماری حصبه
● روش بررسی:
برای راه اندازی روش تشخیص سریع و اختصاصی عامل حصبه از روش PCR سریع استفاده شد. پرایمرهای اختصاصی توالی ژنهای prt, tyv, invA واقع در کروموزوم سالمونلاتیفی انتخاب گردید. DNA ژنومی از سویه های مختلف استاندارد سالمونلا و انواع ایزوله های بالینی استخراج و با استفاده از مخلوطی از پرایمرهای ذکر شده جهت تشخیص دقیق و سریع مورد بررسی قرار گرفت. جهت بررسی ویژگیهای این باکتری، از سایر باکتری های خانواده انتروباکتریاسه و همچنین کوکسی های گرم مثبت استفاده شد. جهت بررسی حساسیت از دو روش شمارش کلنی و رقت ژنوم استفاده شد. جهت افزایش دقت و سرعت آزمایش و کاهش زمان تشخیص، بهینه سازی های مختلفی در برنامه و شرایط واکنش صورت گرفت.
● یافته ها:
بررسی این روش در سویه های استاندارد و بالینی مشخص نمود که پرایمرها اختصاصی است و محصولات با اندازه مورد نظر تولید گردید. این پرایمرها با هیچکدام از انتروباکتریاسه ها، سایر سالمونلاها و همچنین کوکسی های گرم مثبت محصولی را ایجاد نکرد. روش Uniplex PCR سالمونلا را از سایر باکتریها و روش Multiplex PCR سالمونلا تیفی را از سایر سالمونلاها تفکیک می نماید. بررسی حساسیت این روش با شمارش کلنی و همچنین رقت ژنوم نشان داد که این روش قادر است ۱ تا ۱۰ کپی ژنوم و یا ۱۰-۱ واحد کلنی (CFU) باکتری سالمونلا تیفی را بطور اختصاصی تشخیص دهد. با کوتاه نمودن مراحل آزمایش در دستگاههای متداول چرخه حرارتی مدت فرایند PCR به ۳۲ دقیقه کاهش یافت و کل زمان مورد نیاز تشخیص تا کسب پاسخ نهایی کمتراز ۹۰ دقیقه می باشد. برای تایید صحت محصولات ایجاد شده در PCR این قطعات تعیین ترادف (Sequencing) گردیدند. مقایسه توالی های حاصل از سویه جدا شده از بیمار ایرانی با بانک ژن مشخص نمود که ترادف قطعات مربوط به ژنهای prt و tyv ۱۰۰ درصد با ژنهای مرجع شباهت دارند و ترادف مربوط به ژن invA سویه ایران با سه نوکلئوتید تفاوت با سویه مرجع واجد ۹۹ درصد مشابه می باشد. یافته دیگر این بود که با استفاده از پرایمر S۳-S۴ می توان سالمونلا انفانتیس و هاوانا را نیز از یکدیگر تفکیک نمود.
● نتیجه گیری:
بر اساس نتایج این تحقیق، روش مولتی پلکس PCR واحدی جهت تشخیص سریع و تفکیک سالمونلاتیفی از سایر انتروباکتریاسه ها و همچنین تفکیک از سایر باکتری های خانواده سالمونلاها حاصل گردید که می تواند جهت تشخیص سریع این عامل در نمونه های مختلف مورد استفاده قرار گیرد.
سکانس های محصولات PCR با شماره های AY۷۷۱۳۶۳, AY۷۷۱۳۶۲, AY۷۷۱۳۶۴ در بانک ژن جهانی ثبت گردیده است.
علی کرمی
زینب احمدی
زهرا سفیری
زینب احمدی
زهرا سفیری
منبع : پایگاه اطلاعات علمی
نمایندگی زیمنس ایران فروش PLC S71200/300/400/1500 | درایو …
پیچ و مهره پارس سهند
تعمیر جک پارکینگ
خرید بلیط هواپیما
دورههای مدیریتی دانشگاه تهران
انتخابات ریاست جمهوری انتخابات انتخابات ریاست جمهوری 1403 انتخابات ریاست جمهوری چهاردهم امام خمینی وزارت کشور ایران محمود احمدی نژاد ریاست جمهوری ستاد انتخابات کشور انتخابات ریاست جمهوری ۱۴۰۳ انتخابات 1403
هواشناسی ارتحال امام سازمان هواشناسی تهران آتش سوزی پلیس راهور شهرداری تهران پلیس فضای مجازی دستگیری قتل آموزش و پرورش
وام ازدواج قیمت دلار قیمت طلا قیمت خودرو دولت سیزدهم گمرک خودرو مسکن بانک مرکزی برق بازار خودرو بازنشستگان
تلویزیون زهره حمیدی سینمای ایران رسانه ملی سینما امام خمینی (ره) سریال تئاتر
دانشگاه آزاد اسلامی منظومه شمسی فناوری ویروس
رژیم صهیونیستی اسرائیل لبنان فلسطین آمریکا جنگ غزه حماس چین روسیه غزه جو بایدن ترکیه
پرسپولیس فوتبال استقلال جواد نکونام رئال مادرید باشگاه پرسپولیس لیگ برتر لیگ برتر ایران لیگ قهرمانان اروپا مس رفسنجان لیگ برتر فوتبال ایران باشگاه استقلال
همراه اول سرطان باتری مایکروسافت ایلان ماسک اپل تلگرام مریخ
استرس ویتامین خودکشی نوزاد سیگار قهوه دخانیات