تشخیص آلل‌ های HLA-DR با روش PCR-SSP و مقایسه نتایج روش سرولوژیک با آن

● هدف:
مقایسه نتایج بدست آمده در روش سرولوژیک جهت تشخیص آلل‌های HLA-DR با نتایج روش جدید PCR-SSP
● مواد و روشها:‌
تعداد ۵۵ نمونه خون محیطی به طور تصادفی از مراجعین به آزمایشگاه پیوند اعضاء‌ در اصفهان گرفته شد و تشخیص آلل‌های HLA-DR با هر دو روش مولکولی و سرولوژی صورت گرفت. روش سرولوژی با استفاده از ۳۰ نوع آنتی‌سرم مختلف جهت تشخیص آلل‌های HLA-DR انجام شد و برای روش PCR-SSP پرایمرهای اختصاصی برای آلل‌های HLA-DRB۱*۰۱-۱۰ (به غیر از (DR۶, ۸, ۱۰ و نیزHLA-DR۵۲ و DR۵۳ مورد استفاده قرار گرفت. پس از استخراج DNA با استفاده از سیزده جفت پرایمر اختصاصی برای هر نمونه و به طور جداگانه واکنش PCR انجام گردید. در این تحقیق کنترل مثبت داخلی قطعه‌ای از توالی سومین اینترون لوکوس DR بود. پس از انجام PCR محصولات واکنش بر روی ژل آگارز ۲ درصد الکتروفورز شده و در نهایت عکسبرداری از ژل، تفسیر و مقایسه نتایج صورت گرفت. یافته‌ها: نتایج ۳۱ نمونه (۳/۵۶ درصد) کاملا مطابق روش سرولوژی بود. ۱۲ مورد (۲۲ درصد) در سرولوژیک هتروزیگوت و در مولکولی هموزیگوت تشخیص داده شدند. ۷ مورد (۷/۱۲ درصد) در هر دو روش هتروزیگوت بودند اما در یک آلل اختلاف داشتند. ۲ مورد (۶/۳ درصد) در روش سرولوژیک هموزیگوت و در مولکولی هتروزیگوت بودند و نیز یک مورد (۸/۱ درصد) در هر دو روش هموزیگوت بود اما بدین صورت که در سرولوژی HLA-DR۱۴ و در مولکولی HLA-DR۱۱ مشخص شد و نهایتا ۲ مورد از ۵۵ نمونه (۶/۳ درصد) در روش سرولوژیک قابل تشخیص نبودند. در نهایت تجزیه و تحلیل داده‌ها با استفاده از نرم‌افزار آماری SPSS و به کمک آزمونهای غیرپارامتریک (تست (Mc Nemar انجام شد.
● نتیجه‌گیری:
نتایج بدست آمده از روش سرولوژیک معمول به میزان ۷/۴۳ درصد با نتایج روش PCR-SSP اختلاف داشت و این بیانگر خطای زیاد روش سرولوژی و یا به عبارت دیگر صحت بیشتر روش PCR-SSP برای DR-Typing می‌باشد.

قاسم سلگی
مینو ادیب
مجید یاران
عباس رضایی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی