اثر سولفور موستارد و سیکلوفسفامید بر بقا سلولی در محیط کشت و نقش پیش گیرانه ویتامین E

● مقدمه:
ماکروفاژهای صفاقی موش در آزمایشگاه برای مدتی زنده می مانند. پس از آن تعداد سلول های زنده به دلیل کاهش محیط کشت، سوبسترا یا تولید فاکتورهای مهار کننده و اثر توکسیک نیتریک اکساید کاهش می یابد. عوامل آلکیله کننده نظیر سولفور موستارد و سیکلو فسفامید با توجه به غلظت مورد استفاده بر سیستم ایمنی و عملکرد ماکروفاژها اثر مهاری دارند. لذا، هدف از این مطالعه تعیین اثر ویتامین E به عنوان یک آنتی اکسیدانت بر دوام بقا سلول های ماکروفاژی در حضور سولفور موستارد و سیکلوفسفامید بود.
● مواد و روش کار:
در این مطالعه ابتدا موش ها را بیهوش نموده و مقدار ۵ میلی لیتر بافر فسفات نمکی (PBS) سرد را به داخل صفاق تزریق و پس از ماساژ، با کمک پیپت پاستور تعدادی از سلول های صفاقی جمع آوری گردید. سلول ها را سه بار شسته و پس از شمارش سوسپانسیون سلولی به تعداد لازم تهیه شد. تعداد ۵ ۱۰×۱ سلول در حجم ۰.۲ میلی لیتر محیط کشت کامل به هر چاهک پلیت ۹۶ خانه اضافه شد. پلیت ها ۲ ساعت در شرایط ۳۷ درجه سانتی گراد و ۵ درصد CO۲ انکوبه شده و پس از آن به منظور حذف سلول های غیر ماکروفاژی سه بار با PBS گرم شسته شدند. مجددا به سلول ها، محیط کشت کامل حاوی لیپو پلی ساکارید (=LPS ۳) در حضور یا غیاب سیکلوفسفامید، سولفور موستارد و ویتامین E اضافه شد و در شرایط فوق به مدت ۲۴ ساعت انکوبه شدند. دوام بقا سلولی پس از مخلوط کردن با ترپن بلو شمارش شد. نیتریت به عنوان اندیکاتوری از نیتریک اکساید بروش گریس اندازه گیری شد.
● نتایج:
نتایج نشان داد، مرگ سلولی با افزایش غلظت سیکلوفسفامید و یا سولفور موستارد افزایش می یابد (P<۰.۰۲)، در حالی که در حضور ویتامین E تعداد سلول های مرده کاهش کمتری دارد (p<۰.۲)، ویتامین E توانست با تمام غلظت های سیکلوفسفامید و سولفور موستارد در ایجاد مرگ سلولی مقابله کند ولی این مقابله در غلظت های بالای سولفور موستارد کمتر بود. ویتامین E همچنین باعث کاهش ترشح نیتریک اکساید در محیط کشت در حضور سیکلوفسفامید و سولفور موستارد شد. در حضور ۱۰ میکروگرم سیکلو فسفامید مقدار نیتریت ۵۲۰ نانو مول بوده در حالی که در حضور ویتامین E مقدار آن به ۴۱۰ نانو مول (۲۱.۱۵) درصد کاهش یافته است (P<۰.۰۵). ویتامین E توانسته در مقابل تمام غلظت های سولفور موستارد مانع اثر افزایشی آن بر ترشح نیتریک اکساید شود. ولی با افزایش غلظت سولفور موستارد، اثر ویتامین E کاهش یافته است، به طوری که در غلظت ۸۰ و ۱۶۰ میکرو مول اثر ویتامین E معنی دار نبود (P<۰.۰۷).
● بحث:
مرگ سلول های ماکروفاژی موش در مدت زمان انکوباسیون در محیط کشت در حضور سیکلوفسفامید و یا سولفور موستارد می تواند وابسته به ترشح نیتریک اکساید باشد. ویتامین E با کاهش ترشح نیتریک اکساید می تواند باعث افزایش بقا سلول های ماکروفاژی و کاهش مرگ سلولی شود.

کاظم احمدی
فاطمه عرب سلمانی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی