اثر اینترفرون گاما بر ترشح نیتریک اکساید توسط ماکروفاژهای موش دریافت کننده سیکلوفسفامید

● هدف:
بررسی اثر اینترفرون گاما بر ترشح نیتریک اکساید بعنوان یکی از عملکردهای ایمنی دخیل در فرایند پاتولوژی ریه موش و مقاومت در برابر عفونت های فرصت طلب.
● روش بررسی:
در این مطالعه تجربی موشها بصورت داخل صفاقی روزانه بمدت ۵ روز دوزهای متفاوتی از سیکلوفسفامید را دریافت نمودند. وزن موشها هر هفته یادداشت شد. پس از ۲۸ روز موشها را کشته و مقدار ۵ میلی لیتر PBS سرد را بداخل صفاق تزریق و پس از ماساژ، با کمک پیپت پاستور سلولهای صفاقی بدست آمد. برای تهیه ماکروفاژهای ریوی مقدار ۲ میلی لیتر PBS سرد را بداخل ریه تزریق و با آسپیره نمودن، مایع لاواژ تهیه شد. پس از سه بار شستشو، سوسپانسیون سلولی تهیه شد. در مورد لاواژ پس از سانتریفوژ نمودن، مایع رویی جهت اندازه گیری مقدار نیتریت ذخیره و سلولهای باقیمانده شمارش و سوسپانسیون سلولی تهیه شد. مقدار ۰.۲ میلی لیتر محیط کشت حاوی ۱۰۴ سلول ریوی در میلی لیتر به هر چاهک پلیت ۹۶ خانه منتقل و پس از ۲ ساعت انکوباسیون سلولهای غیر چسبنده (غیر ماکروفاژ) حذف شد. مجددا مقدار ۰.۲ میلی لیتر محیط کشت حاوی ۱۰ میکروگرم در میلی لیتر LPS در حضور یا عدم حضور ۱۰۰ واحد ?-IFN در میلی لیتر به هر چاهک اضافه و بمدت ۲۴ ساعت در ۳۷ درجه سانتیگراد و %۵ CO۲ انکوبه شدند. پس از انکوباسیون مقدار نیتریت موجود در مایع رویی هر چاهک کشت سلولهای ماکروفاژی بعنوان اندیکاتوری از نیتریک اکساید بروش گریس اندازه گیری شد.
● یافته ها:
نتایج نشان داد که غلظت پایین سیکلوفسفامید (۱.۵ میلی گرم در روز) در مقایسه با گروه کنترل باعث کاهش ترشح نیتریک اکساید توسط ماکروفاژهای صفاقی می شود (?±??? و P<۰.۰۵) در حالی که ترشح آن توسط ماکروفاژهای ریوی در مقایسه با گروه کنترل معنی دار نبود. همچنین غلظت زیاد سیکلوفسفامید (۴.۵ میلی گرم در روز) در مقایسه با گروه کنترل باعث افزایش ترشح نیتریک اکساید توسط ماکروفاژهای صفاقی و ریوی شد (۵ ۷۰±% در ماکروفاژهای صفاقی و ۵۶% در ماکروفاژهای ریوی و P<۰.۰۵). تحریک توام با LPS و ?-IFN باعث افزایش ۲۰۰% و ۲۴۰% ترشح نیتریک اکساید به ترتیب توسط ماکروفاژهای صفاقی و ریوی شد (P<۰.۰۲).
● نتیجه گیری:
بنابراین به نظر می رسد که بخشی از عوارض ایمونوساپرسیوی که منجر به رشد عفونتهای فرصت طلب می شود احتمالا مربوط به کاهش نیتریک اکساید باشد. لذا با توجه به اینکه IFN باعث افزایش ترشح نیتریک اکساید در گروهی که دوز بالای سیکلوفسفامید دریافت کرده اند می شود.بهتر است در حالتی که میزبان تحت درمان سیکلوفسفامید است از عوامل تقویت کننده پاسخ ایمنی نیز استفاده نمود.

کاظم احمدی
قاسم سلگی
محمود مفید
حسین ایمانی

منبع : پایگاه اطلاعات علمی